Cynhyrchion
Pecyn Canfod SARS-Cov-2-RT-PCR Lifecosm ar gyfer 2019-nCoV
Defnydd disgwyliedig
Defnyddir y pecyn hwn ar gyfer canfod ansoddol y coronafeirws newydd (2019-nCoV) gan ddefnyddio swabiau gwddf, swabiau nasopharyngeal, hylif golchi bronchoalfeolaidd, a phoer. At ddibenion cyfeirio clinigol yn unig y mae canlyniad canfod y cynnyrch hwn, ac ni ddylid ei ddefnyddio fel yr unig dystiolaeth ar gyfer diagnosis a thriniaeth glinigol. Argymhellir dadansoddiad cynhwysfawr o'r cyflwr ar y cyd ag amlygiadau clinigol y claf a phrofion labordy eraill.
Egwyddor arolygu
Mae'r pecyn yn seiliedig ar dechnoleg RT-PCR un cam. Mewn gwirionedd, dewiswyd genynnau ORF1ab ac N y coronafeirws newydd 2019 (2019-nCoV) fel y rhanbarthau targed ymhelaethu. Mae primerau penodol a phrobiau fflwroleuol (mae probiau genyn N wedi'u labelu â FAM a phrobiau ORF1ab wedi'u labelu â HEX) wedi'u cynllunio i ganfod RNA coronafeirws math newydd 2019 mewn samplau. Mae'r pecyn hefyd yn cynnwys system ganfod rheolaeth fewnol endogenaidd (prob genyn rheoli mewnol wedi'i labelu â CY5) i fonitro'r broses o gasglu samplau, RNA ac ymhelaethu PCR, a thrwy hynny leihau canlyniadau negyddol ffug.
Prif gydrannau
| Cydrannau | Cyfaint（48T/Pecyn） |
| Datrysiad adwaith RT-PCR | 96µl |
| Probemixture TaqMan primer nCOV (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| Rheolaeth negyddol | 1500µl |
| nCOV Rheolaeth gadarnhaol （l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Adweithyddion eich hun: adweithyddion echdynnu neu buro RNA. Rheolaeth negatif/positif: Y rheolaeth bositif yw RNA sy'n cynnwys y darn targed, tra bod y rheolaeth negatif yn ddŵr heb asid niwclëig. Yn ystod y defnydd, dylent gymryd rhan yn yr echdynnu a dylid eu hystyried yn heintus. Dylid eu trin a'u gwaredu yn unol â'r rheoliadau perthnasol.
Y genyn cyfeirio mewnol yw'r genyn RnaseP dynol.
Amodau storio a dyddiad dod i ben
-20±5℃, osgoi rhewi a dadmer dro ar ôl tro fwy na 5 gwaith, yn ddilys am 6 mis.
Offeryn cymwys
Gyda FAM / HEX / CY5 ac offeryn PCR fflwroleuol aml-sianel arall.
Gofynion sbesimen
1. Mathau o sbesimenau cymwys: swabiau gwddf, swabiau nasopharyngeal, hylif golchi bronchoalfeolaidd, crachboer.
2. Casglu sbesimen (techneg aseptig)
Swab ffaryngeal: Sychwch y tonsiliau a wal gefn y ffaryngeal gyda dau swab ar yr un pryd, yna trochwch ben y swab mewn tiwb prawf sy'n cynnwys y toddiant samplu
Crachboer: Ar ôl i'r claf gael peswch dwfn, casglwch y crachboer wedi'i besychu mewn tiwb prawf â chap sgriw sy'n cynnwys y toddiant samplu; hylif golchi bronchoalfeolaidd: Samplu gan weithwyr meddygol proffesiynol. 3. Storio a chludo samplau
Dylid profi sbesimenau ar gyfer ynysu firysau a phrofi RNA cyn gynted â phosibl. Gellir storio sbesimenau y gellir eu canfod o fewn 24 awr ar 4℃; y rhai na ellir eu canfod o fewn 24
dylid storio oriau ar -70℃ neu islaw (os nad oes cyflwr storio o -70℃, dylid eu
wedi'i storio dros dro mewn oergell o -20℃). Dylid osgoi rhewi a dadmer sbesimenau dro ar ôl tro yn ystod cludiant. Dylid anfon sbesimenau i'r labordy cyn gynted â phosibl ar ôl eu casglu. Os oes angen cludo samplau dros bellteroedd hir, argymhellir storio iâ sych.
Dulliau Prawf
1 Prosesu samplau ac echdynnu RNA (ardal prosesu samplau)
Argymhellir cymryd 200μl o sampl hylif ar gyfer echdynnu RNA. Am y camau echdynnu cysylltiedig, cyfeiriwch at gyfarwyddiadau'r citiau echdynnu RNA masnachol. Mae'r negatif a'r negatif ill dau
Roedd y rheolyddion yn y pecyn hwn yn rhan o'r echdynnu.
2 Paratoi adweithydd PCR (ardal paratoi adweithydd)
2.1 Tynnwch yr holl gydrannau o'r pecyn a'u dadmer a'u cymysgu ar dymheredd ystafell. Allgyrchwch ar 8,000 rpm am ychydig eiliadau cyn eu defnyddio; cyfrifwch faint sydd ei angen o adweithyddion, a pharatoir y system adwaith fel y dangosir yn y tabl canlynol:
| Cydrannau | N dogn (system 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Datrysiad adwaith RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = nifer y samplau a brofwyd + 1 (rheolaeth negyddol) + 1 (nCOVrheolaeth bositif) | |
2.2 Ar ôl cymysgu'r cydrannau'n drylwyr, centrifugiwch am gyfnod byr i adael i'r holl hylif ar wal y tiwb ddisgyn i waelod y tiwb, ac yna rhannwch y system ymhelaethu 20 µl i'r tiwb PCR.
3 Samplu (ardal paratoi sbesimen)
Ychwanegwch 5μl o'r rheolyddion negatif a phositif ar ôl echdynnu. Ychwanegir RNA'r sampl i'w brofi at y tiwb adwaith PCR.
Caewch y tiwb yn dynn a'i allgyrchu ar 8,000 rpm am ychydig eiliadau cyn ei drosglwyddo i'r ardal canfod ymhelaethiad.
4 mwyhad PCR (ardal ganfod wedi'i mwyhau)
4.1 Rhowch y tiwb adwaith yng nghell sampl yr offeryn, a gosodwch y paramedrau fel a ganlyn:
| llwyfan | Cylchdro rhif | Tymheredd(°C) | Amser | casgliadsafle |
| Gwrthdroitrawsgrifiad | 1 | 42 | 10 munud | - |
| Cyn-ddadnatureiddion | 1 | 95 | 1 munud | - |
| Cylchdro | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30au | casglu data |
Dewis sianel canfod offeryn: Dewiswch y sianel FAM, HEX, CY5 ar gyfer y signal fflwroleuol. Ar gyfer fflwroleuol cyfeirio DIM, peidiwch â dewis ROX.
5 Dadansoddiad canlyniad (Cyfeiriwch at gyfarwyddiadau arbrofol pob offeryn ar gyfer gosod)
Ar ôl yr adwaith, cadwch y canlyniadau. Ar ôl dadansoddi, addaswch y gwerth cychwyn, y gwerth terfynol, a gwerth trothwy'r llinell sylfaen yn ôl y ddelwedd (gall y defnyddiwr addasu yn ôl y sefyllfa wirioneddol, gellir gosod y gwerth cychwyn i 3 ~ 15, gellir gosod y gwerth terfynol i 5 ~ 20, addasiad) yn y graff logarithmig Ar drothwy'r ffenestr, mae'r llinell drothwy yn y cyfnod logarithmig, ac mae cromlin ymhelaethu'r rheolaeth negyddol yn llinell syth neu islaw'r llinell drothwy).
6 Rheoli ansawdd (Mae rheolaeth weithdrefnol wedi'i chynnwys yn y prawf) Rheolaeth negyddol: Dim cromlin ymhelaethu amlwg ar gyfer sianeli canfod FAM, HEX, CY5
Rheolaeth bositif COV: cromlin ymhelaethu amlwg o sianeli canfod FAM a HEX, gwerth Ct≤32, ond dim cromlin ymhelaethu o sianel CY5;
Rhaid bodloni'r gofynion uchod ar yr un pryd yn yr un arbrawf; fel arall, mae'r arbrawf yn annilys ac mae angen ei ailadrodd.
7 Penderfynu ar ganlyniadau.
7.1 Os nad oes cromlin ymhelaethu neu werth Ct > 40 yn sianeli FAM a HEX y sampl prawf, a bod cromlin ymhelaethu yn sianel CY5, gellir barnu nad oes RNA coronafeirws newydd 2019 (2019-nCoV) yn y sampl;
.2 Os oes gan y sampl prawf gromliniau ymhelaethu amlwg yn y sianeli FAM a HEX, a bod y gwerth Ct yn ≤40, gellir barnu bod y sampl yn bositif am y coronafeirws newydd 2019 (2019-nCoV).
7.3 Os oes gan y sampl prawf gromlin ymhelaethu glir mewn un sianel o FAM neu HEX yn unig, ac mae'r gwerth Ct yn ≤40, ac nad oes cromlin ymhelaethu yn y sianel arall, mae angen ailbrofi'r canlyniadau. Os yw canlyniadau'r ailbrofi yn gyson, gellir barnu bod y sampl yn bositif ar gyfer y newydd
coronafeirws 2019 (2019-nCoV). Os yw canlyniad yr ail brawf yn negyddol, gellir barnu bod y sampl yn negyddol ar gyfer coronafeirws newydd 2019 (2019-nCoV).
Gwerth barn gadarnhaol
Defnyddir y dull cromlin ROC i bennu gwerth CT cyfeirio'r pecyn a'r gwerth cyfeirio rheolaeth fewnol yw 40.
Dehongli canlyniadau profion
1. Dylid profi pob arbrawf am reolaethau negatif a phositif. Dim ond pan fydd y rheolaethau'n bodloni gofynion rheoli ansawdd y gellir pennu canlyniadau profion.
2. Pan fydd sianeli canfod FAM a HEX yn bositif, gall y canlyniad o sianel CY5 (sianel reoli fewnol) fod yn negyddol oherwydd cystadleuaeth system.
3. Pan fydd canlyniad y rheolaeth fewnol yn negatif, os yw sianeli canfod FAM a HEX y tiwb prawf hefyd yn negatif, mae'n golygu bod y system wedi'i hanalluogi neu fod y llawdriniaeth yn anghywir, mae'r prawf yn annilys. Felly, mae angen ailbrofi'r samplau.
