Cynhyrchion
Pecyn canfod Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ar gyfer 2019-nCoV
Defnydd disgwyliedig
Defnyddir y pecyn hwn ar gyfer canfod ansoddol coronafirws newydd (2019-nCoV) gan ddefnyddio swabiau gwddf, swabiau nasopharyngeal, hylif lavage broncoalfeolar, crachboer. Dim ond ar gyfer cyfeirio clinigol y mae canlyniad canfod y cynnyrch hwn, ac ni ddylid ei ddefnyddio fel yr unig un. tystiolaeth ar gyfer diagnosis a thriniaeth glinigol. Argymhellir dadansoddiad cynhwysfawr o'r cyflwr ar y cyd ag amlygiadau clinigol y claf a phrofion labordy eraill.
Egwyddor arolygu
Mae'r pecyn yn seiliedig ar dechnoleg RT-PCR un cam.Mewn gwirionedd, dewiswyd genynnau ORF1ab ac N coronafirws newydd 2019 (2019-nCoV) fel y rhanbarthau targed ymhelaethu.Mae preimwyr penodol a stilwyr fflwroleuol (mae stilwyr genyn N wedi'u labelu â FAM ac mae stilwyr ORF1ab wedi'u labelu â HEX) wedi'u cynllunio i ganfod RNA coronafirws math newydd 2019 mewn samplau.Mae'r pecyn hefyd yn cynnwys system canfod rheolaeth fewnol mewndarddol (chwiliwr genyn rheolaeth fewnol wedi'i labelu â CY5) i fonitro'r broses o gasglu samplau, ymhelaethu ar RNA a PCR, a thrwy hynny leihau canlyniadau negyddol ffug.
Prif gydrannau
| Cydrannau | Cyfrol（48T/Kit） |
| Ateb adwaith RT-PCR | 96µl |
| Probemixture TaqMan primer nCOV (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| Rheolaeth negyddol | 1500µl |
| nCOV Rheolaeth bositif （l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Adweithyddion eu hunain: echdynnu RNA neu adweithyddion puro.Rheolaeth negyddol/cadarnhaol: Y rheolaeth bositif yw RNA sy'n cynnwys y darn targed, tra bod y rheolaeth negyddol yn ddŵr di-asid niwclëig.Yn ystod y defnydd, dylent gymryd rhan yn yr echdynnu a dylid eu hystyried yn heintus.Dylid eu trin a chael gwared arnynt yn unol â'r rheoliadau perthnasol.
Y genyn cyfeirio mewnol yw'r genyn RnaseP dynol.
Amodau storio a dyddiad dod i ben
-20 ± 5 ℃, osgoi rhewi a dadmer dro ar ôl tro fwy na 5 gwaith, yn ddilys am 6 mis.
Offeryn cymwys
Gyda FAM / HEX / CY5 ac offeryn PCR fflwroleuol aml-sianel arall.
Gofynion enghreifftiol
1. Mathau sbesimen cymwys: swabiau gwddf, swabiau nasopharyngeal, hylif lavage broncoalfeolar, crachboer.
Casgliad 2.Specimen (techneg aseptig)
Swab pharyngeal: Sychwch y tonsiliau a'r wal pharyngeal ôl gyda dau swab ar yr un pryd, yna trochwch y pen swab mewn tiwb profi sy'n cynnwys yr hydoddiant samplu
Sputum: Ar ôl i'r claf gael peswch dwfn, casglwch y sbwtwm peswch mewn tiwb profi cap sgriw sy'n cynnwys yr ateb samplu;Hylif lavage broncoalfeolar: Samplu gan weithwyr meddygol proffesiynol.3.Storage a chludo samplau
Dylid profi sbesimenau ar gyfer ynysu firws a phrofion RNA cyn gynted â phosibl.Gellir storio sbesimenau y gellir eu canfod o fewn 24 awr ar 4 ℃;y rhai na ellir eu canfod o fewn 24
dylid storio oriau ar -70 ℃ neu is (os nad oes cyflwr storio o -70 ℃, dylent fod
storio dros dro ar -20 ℃ oergell).Dylai sbesimenau osgoi rhewi a dadmer dro ar ôl tro wrth eu cludo.Dylid anfon sbesimenau i'r labordy cyn gynted â phosibl ar ôl eu casglu.Os oes angen cludo samplau dros bellteroedd hir, argymhellir storio rhew sych.
Dulliau Prawf
1 Prosesu sampl ac echdynnu RNA (ardal prosesu sampl)
Argymhellir cymryd 200μl o sampl hylif ar gyfer echdynnu RNA.Ar gyfer camau echdynnu cysylltiedig, cyfeiriwch at gyfarwyddiadau pecynnau echdynnu RNA masnachol.Y negyddol a'r negyddol
roedd rheolaethau yn y pecyn hwn yn rhan o'r echdynnu.
2 baratoi adweithydd PCR (ardal paratoi adweithydd)
2.1 Tynnwch yr holl gydrannau o'r pecyn a'u dadmer a'u cymysgu ar dymheredd ystafell.Centrifuge ar 8,000 rpm am ychydig eiliadau cyn ei ddefnyddio;cyfrifwch y swm gofynnol o adweithyddion, ac mae'r system adwaith yn cael ei pharatoi fel y dangosir yn y tabl canlynol:
| Cydrannau | N gwasanaethu (system 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Ateb adwaith RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = nifer y samplau a brofwyd + 1 (rheolaeth negyddol) + 1 (nCOVrheolaeth gadarnhaol) | |
2.2 Ar ôl cymysgu'r cydrannau'n drylwyr, centrifuge am gyfnod byr i adael i'r holl hylif ar wal y tiwb ddisgyn i waelod y tiwb, ac yna aliquot y system ymhelaethu 20 µl i mewn i'r tiwb PCR.
3 Samplu (ardal paratoi enghreifftiol)
Ychwanegwch 5μl o'r rheolyddion negyddol a chadarnhaol ar ôl echdynnu.Mae RNA y sampl sydd i'w brofi yn cael ei ychwanegu at y tiwb adwaith PCR.
Capiwch y tiwb yn dynn a'i allgyrchu ar 8,000 rpm am ychydig eiliadau cyn ei drosglwyddo i'r ardal canfod mwyhad.
Ymhelaethiad 4 PCR (man canfod chwyddedig)
4.1 Rhowch y tiwb adwaith yng nghell sampl yr offeryn, a gosodwch y paramedrau fel a ganlyn:
| llwyfan | Beicio rhif | Tymheredd(°C) | Amser | casgliadsafle |
| Gwrthdroitrawsgrifiad | 1 | 42 | 10 munud | - |
| Cyn-denaturation | 1 | 95 | 1 mun | - |
| Beicio | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | casglu data |
Dewis sianel canfod offeryn: Dewiswch y sianel FAM 、HEX 、 CY5 ar gyfer y signal fflworoleuedd.Er mwyn cyfeirio DIM fflwroleuol, peidiwch â dewis ROX.
5 Dadansoddiad canlyniad (Cyfeiriwch at gyfarwyddiadau arbrofol pob offeryn ar gyfer gosod)
Ar ôl yr adwaith, arbedwch y canlyniadau.Ar ôl dadansoddi, addaswch y gwerth cychwyn, y gwerth terfynol, a gwerth trothwy'r llinell sylfaen yn ôl y ddelwedd (gall y defnyddiwr addasu yn ôl y sefyllfa wirioneddol, gellir gosod y gwerth cychwyn i 3 ~ 15, gellir gosod y gwerth terfynol i 5 ~ 20, addasiad) yn y graff logarithmig Ar drothwy'r ffenestr, mae'r llinell drothwy yn y cyfnod logarithmig, ac mae cromlin chwyddo'r rheolaeth negyddol yn llinell syth neu'n is na'r llinell drothwy).
6 Rheoli cwta （Mae rheolaeth weithdrefnol wedi'i chynnwys yn y prawf） Rheolaeth negyddol: Dim cromlin chwyddo amlwg ar gyfer sianeli canfod FAM, HEX, CY5
Rheolaeth bositif COV: cromlin ymhelaethu amlwg o sianeli canfod FAM a HEX, Ct value≤32, ond dim cromlin chwyddo sianel CY5;
Rhaid bodloni'r gofynion uchod ar yr un pryd yn yr un arbrawf;fel arall, mae'r arbrawf yn annilys ac mae angen ei ailadrodd.
7 Pennu canlyniadau.
7.1 Os nad oes cromlin ymhelaethu na gwerth Ct > 40 yn sianeli FAM a HEX y sampl prawf, a bod cromlin ymhelaethu yn sianel CY5, gellir barnu nad oes coronafirws newydd 2019 (2019-nCoV) RNA yn y sampl;
.2 Os oes gan y sampl prawf gromliniau ymhelaethu amlwg yn y sianeli FAM a HEX, a'r gwerth Ct yw ≤40, gellir barnu bod y sampl yn bositif ar gyfer coronafirws newydd 2019 (2019-nCoV).
7.3 Os oes gan y sampl prawf gromlin ymhelaethu clir yn unig mewn un sianel o FAM neu HEX, a'r gwerth Ct yw ≤40, ac nid oes unrhyw gromlin ymhelaethu yn y sianel arall, mae angen ailbrofi'r canlyniadau.Os yw canlyniadau'r ail brawf yn gyson, gellir barnu bod y sampl yn gadarnhaol ar gyfer y sampl newydd
coronafeirws 2019 (2019-nCoV).Os yw canlyniad yr ailbrawf yn negyddol, gellir barnu bod y sampl yn negyddol ar gyfer coronafirws newydd 2019 (2019-nCoV).
Gwerth barn gadarnhaol
Defnyddir dull cromlin ROC i bennu gwerth cyfeirio CT y pecyn a'r gwerth cyfeirio rheolaeth fewnol yw 40.
Dehongli canlyniadau profion
1. Dylid profi pob arbrawf am reolaethau negyddol a chadarnhaol.Dim ond pan fydd rheolaethau yn bodloni gofynion rheoli ansawdd y gellir pennu canlyniadau profion
2.Pan fydd y sianeli canfod FAM a HEX yn gadarnhaol, efallai y bydd y canlyniad o'r sianel CY5 (sianel rheolaeth fewnol) yn negyddol oherwydd cystadleuaeth system.
3. Pan fydd canlyniad rheolaeth fewnol yn negyddol, os yw sianeli canfod FAM a HEX y tiwb prawf hefyd yn negyddol, mae'n golygu bod y system yn anabl neu fod y llawdriniaeth yn anghywir, mae'r prawf yn annilys.Felly, mae angen ailbrofi'r samplau.
